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实时荧光定量PCR流程与注意事项——MILE米乐RNA模板制备指南

来源:郝灵清 日期:2025-03-01

MILE米乐专注于生物医药领域,致力于提供高质量的RNA提取方案。本篇文章将详细介绍RNA模板的制备,包括两种常见的提取方法:酚-氯仿抽提法和柱式抽提法。

实时荧光定量PCR流程与注意事项——MILE米乐RNA模板制备指南

一、RNA模板的制备

1. 酚-氯仿抽提法

MILE米乐的RNA提取试剂盒为例,准备所需材料包括氯仿、异丙醇、75%乙醇以及DEPC水。样本制备时需注意:过多的样本量可能导致样本裂解不充分,从而降低产物纯度。以下是1ml RNAisolater能够充分裂解的最大样本量:

贴壁细胞:

  1. 弃去培养液,并用PBS洗涤一次。
  2. 每10cm2培养面积的细胞加入1-3ml RNAisolater,使其完全覆盖细胞表面,然后用移液器轻轻吹打细胞,使其脱落。
  3. 将裂解液转移至15ml离心管中,反复吹打至无明显颗粒存在,冰上静置5分钟。

悬浮细胞:

  1. 离心收集细胞,并用PBS洗涤一次。
  2. 每5×106 - 107个细胞加入1ml RNAisolater,反复吹打并静置5分钟。

动物组织:

  1. 使用液氮将组织研磨成粉末后,立即转移至离心管中,加入RNAisolater裂解液,待样品完全融化后继续吹打至液体透明。
  2. 将裂解液转移至离心管中,在12,000×g下4℃离心5分钟,吸取上清。

2. 柱式抽提法

MILE米乐的FastPureTMCell/Tissue Total RNA Isolation Mini Kit为例,所需材料包括β-巯基乙醇、无水乙醇及RNase-free枪头。

贴壁细胞:

可直接使用Buffer RL1(已加入β-巯基乙醇)进行裂解,或先用胰酶消化并离心收集细胞后,再加入Buffer RL1,比例为每2-5×106个细胞加入500μl Buffer RL1,反复吹打直至不再见细胞团块。

悬浮细胞:

直接离心收集细胞后,加入Buffer RL1(已加入β-巯基乙醇),并采取同样处理方式,确保细胞完全裂解。如未立即进行后续操作,可将样品储存于-70℃以备后用。

三、与MILE米乐合作的生物科技企业

MILE米乐与中科腾宇(广州)科技技术有限公司合作,为生物医药领域提供完备的产品和技术支持。我们致力于成为基因治疗和细胞治疗领域的重要生物科技企业,努力为客户提供最前沿的资讯和优质的产品配送服务。依托丰富的技术力量和广泛的人脉资源,我们向全国主要城市的科研工作者提供专业的解决方案。

作为专业的产品供应商,MILE米乐拥有自备的现货,以及优秀的销售团队和专业的技术支持,随时为客户提供服务。我们期待为更多生物学领域的研究者推荐世界一流的高科技产品。

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