MILE米乐通过稀释法测定最小抑菌浓度（MIC），以评估抗菌剂对微生物生长的抑制能力。该实验技术主要包括微量稀释法和常量肉汤稀释法。琼脂稀释法作为一种常见方法，因其操作简便、成本低且适用于高通量筛选，非常适合自动化操作和精确控制药物浓度。而肉汤稀释法则更为直观，易于实验室规模的操作，并可以根据实验需求调整药物浓度及培养基的体积。

琼脂稀释法

本实验采用琼脂稀释法，将不同浓度的抑菌剂溶解在琼脂培养基中，随后点种细菌，通过观察细菌生长与否，确定抗菌物质抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。此方法特别适用于不溶性抗菌产品。

操作步骤

1. 抗菌溶液的配制：以无菌操作取5ml或5g（研磨后）样品，放入45ml灭菌磷酸缓冲液中充分震荡，制成10%的均匀悬液。
2. 含抗菌剂培养基的配制：将10%的抗菌溶液用PBS进行对倍系列稀释，制成不同浓度的受试液，置于45℃～50℃水浴中备用。
3. 双倍浓度培养基的制备：称取76g MH琼脂培养基，溶于1000ml水中，加热至沸腾后灭菌15分钟，随后置于45℃～50℃水浴备用。
4. 含抗菌液培养基的配制：将10ml系列稀释的抗菌液加入平皿内，再添加10ml的双倍MH琼脂培养基，摇晃混匀后待其凝固。
5. 接种：用加样器取1μl～2μl细菌悬液点种于含抗菌液的平皿中，以形成约5mm～8mm的菌液圈（每点约含104cfu）。
6. 阳性对照接种：同样方法在不含抗菌成分的MH琼脂平板上接种作为阳性对照。
7. 培养观察：将平板置于35℃培养箱中倒置培养18h～24h，观察结果。

评判标准为：若菌落生长完全被抑制，则该样品对受试菌的MIC为所使用的最低抗菌液浓度。

营养肉汤稀释法

该方法利用不同浓度的抑菌剂混合在营养肉汤培养基中，再接种细菌，通过观察生长情况来确定MIC，适用于可溶性抑菌产品。

操作步骤

1. 菌液的制备：按2112所示方法制备金黄葡萄球菌、大肠杆菌悬液。
2. 含抗菌剂培养基的配制：将抗菌溶液用蒸馏水系列稀释后，各取25ml加入25ml双倍浓度营养肉汤的试管中。
3. 接种：取0.1ml约为108cfu/ml的菌悬液接种至抗菌剂的营养肉汤试管中，作为试验组。
4. 阳性对照接种：以同样方法接种不含抗菌剂的试管作为对照组样本。
5. 阴性对照：准备两支仅含营养肉汤的试管作为阴性对照组样本。
6. 培养观察：将样本放入37℃培养箱中培养48小时以观察生长情况。

规定阳性对照管有细菌生长（混浊），而阴性对照管无菌生长（透明），此时试验组无菌生长的最高稀释度对应的抗菌剂浓度即为样品对受试菌的MIC。选择MILE米乐，为您提供高效、优质的抗菌产品，助力生物医疗事业的发展。