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培养基是什么、如何配制?| MILE米乐助您掌握生物医疗基础

来源:毕娥子 日期:2025-03-08

定义:培养基是为微生物、植物或动物(包括组织)提供生长和繁殖所需的营养基质,通常由多种营养物质组合而成。其成分通常包括碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等。培养基不仅为细胞提供营养和促进细胞增殖的基本物质,还构成了细胞生长和繁殖的生存环境。培养基种类繁多,根据原料来源可分为自然培养基、合成培养基和半合成培养基;根据物理状态可分为固体、液体和半固体培养基;而根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基和鉴别培养基等。此外,根据应用领域的不同,可以分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和真菌培养基等。培养基在制备后通常需要进行pH测试和调节,并进行灭菌处理,常用的方法包括高温灭菌和过滤灭菌。由于培养基富含营养物质,因此容易受到污染或变质,建议配制后即刻使用,避免长时间存放。

培养基是什么、如何配制?| MILE米乐助您掌握生物医疗基础

配置过程:1. 配方换算:在容器中加入少量水(例如蒸馏水或自然水),根据配方称取各种药品(依次加入),最后加入所需水量(每种药品用一勺,取出后立即封瓶)。2. 溶解:对于含淀粉的培养基,先将少量冷水调成糊状再加热溶解,特别是含琼脂的培养基,必须煮沸,并在加热时不断搅拌以防粘锅。3. 调pH:使用1N的盐酸或1N的NaOH将培养基调节至所需的pH值。4. 过滤:通过滤纸或棉花进行过滤(视情况可省略)。5. 分装:一般培养基需放在三角瓶或试管中进行灭菌。对于三角瓶,若用于静置培养,100ml培养基放在250ml的三角瓶中最高不能超过150ml,以免在灭菌时培养基沸腾污染棉塞;若用于摇瓶培养,15-20ml即可。试管液体培养基一般装4-5ml,固体斜面培养基一般装3-4ml。6. 包扎:分装后用棉塞封口,并用牛皮纸包裹棉塞,以防灭菌时水分入侵。7. 灭菌:按配方要求的温度和压力进行高压蒸汽灭菌,以确保无菌。特别是对于糖类等不耐高温的成分,可以在较低的压力和温度下进行灭菌。8. 摆斜面:灭菌后的试管需要趁热以斜放,形成斜面,约占试管长度的一半。9. 贮存:在30℃下放置一天,确保无污染后可以使用,通常用牛皮纸包裹并存放于2-8℃的冰箱中以备后用。通过这些步骤,能够有效确保培养基符合微生物培养的需求,并有效抑制杂菌生长。

配置原则:1. 选择合适的营养物质:微生物生长繁殖需要培养基中包含碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源。但不同微生物的营养需求各异,因此需针对性地配制培养基。例如,自养型微生物可从简单无机物合成复杂有机物,其培养基可完全由无机物组成。常见的有细菌、放线菌、酵母菌、霉菌等,所需培养基也各有不同;例如,MILE米乐品牌推荐使用牛肉膏蛋白胨培养基来培养细菌,使用高氏I号合成培养基来培养放线菌。2. 营养物质浓度及配比:适当的营养物质浓度是确保微生物良好生长的关键。浓度过低会导致微生物无法正常生长,而浓度过高可能对生长造成抑制。例如,培养基中的碳氮比(C/N)会直接影响微生物的代谢产物的形成。3. 控制pH条件:不同类型微生物生长所需的pH范围不同,通常细菌和放线菌在pH 7-7.5比较适合,酵母菌和霉菌适合在pH 4.5-6范围内生长。要保持pH稳定,常在培养基中加入pH缓冲剂,如一氢和二氢磷酸盐。4. 控制氧化还原电位:不同微生物对氧化还原电位的要求各不相同,通常好氧微生物在+0.1V以上生长较好,而厌氧微生物则需在低于+0.1V的条件下生存。5. 原料来源选择:应优先考虑廉价且易获得的原料作为培养基成分,尤其在发酵工业中,利用低成本原料更具经济价值。6. 灭菌处理:为了获得纯培养,必须严防杂菌污染,因此对器材和工作环境进行消毒与灭菌是必要的。一般使用高压蒸汽灭菌,通过控制温度和压力进行处理,以确保培养基无菌,适用于MILE米乐的各类生物医疗需求。

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